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构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体抑制内皮细胞
发布时间:2022-07-17 02:07:38 来源:hth华体会注册 作者:hth华体会比分


  原标题:构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体抑制内皮细胞凋亡

  Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5:是一种由运动诱导产生的肌肉因子,其本质是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白,骨骼肌细胞及心肌细胞是其产生的主要来源。Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5经蛋白水解酶作用后剪切修饰形成鸢尾素(Irisin),鸢尾素可以调节糖脂代谢、抑制炎症反应,抑制动脉粥样硬化进程,此外其可通过不同途径抑制细胞凋亡。

  鸢尾素:是由Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5蛋白水解形成的一种多肽激素,由112个氨基酸构成,分子质量约12 kD,其在不同的物种间具有高度同源性。鸢尾素可以上调棕色化相关基因,并通过p38 MAPK和ERK信号通路促进白色脂肪棕色化,燃烧脂肪增加能量代谢,减轻体质量及改善胰岛素抵抗。血清内鸢尾素水平与2型糖尿病、非酒精性脂肪肝、慢性肾病、牛皮癣、骨质疏松症、高血压、动脉粥样硬化和癌症等主要慢性疾病之间存在明显的关联。

  背景:Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5是一种调节糖脂代谢的蛋白分子,可以调控细胞凋亡,且参与抑制动脉粥样硬化的进程。

  目的:通过构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体,转染人脐静脉内皮细胞,验证Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5调控内皮细胞凋亡的作用。

  方法:构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体。取处于对数生长期的人脐静脉内皮细胞,分3组培养:空白组不进行慢病毒转染,对照组转染不含Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5基因的空载体慢病毒,实验组转染Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒,转染7 d后,采用RT-PCR和Western blot检测Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5的mRNA与蛋白表达。转染7 d后,向3组细胞内加入氧化型低密度脂蛋白溶液,采用CCK-8法测定细胞活力,Hoechst 33342/PI双染及流式细胞技术检测细胞凋亡程度。

  结果与结论:①实验组Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5的mRNA与蛋白表达均高于空白组、对照组(P 0.05);②CCK-8检测显示,实验组加入氧化型低密度脂蛋白1,2 h的细胞活力高于空白组、对照组(P 0.05),3组加入氧化型低密度脂蛋白4 h的细胞活力比较差异无显著性意义(P 0.05);③加入氧化型低密度脂蛋白24 h后,流式细胞术检测显示实验组细胞凋亡率低于空白组、对照组(P 0.05),Hoechst 33342/PI双染显示实验组凋亡细胞数量少于空白组、对照组;④结果表明,过表达Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5可以抑制人脐静脉内皮细胞的凋亡。

  中国组织工程研究杂志出版内容重点:组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程

  关键词:Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5, 慢病毒, 转染, 人脐静脉内皮细胞, 凋亡, 动脉粥样硬化

  引用本文:欧航君, 赵广建, 潘裕佳, 龚才伟, 赵权威, 刘大男. 构建Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5过表达慢病毒载体抑制内皮细胞凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(2): 216-222.返回搜狐,查看更多


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